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Plant for PacBio SMRT RNA-Seq Library Constion Kit
| 貨號(hào) | SP0021S | 售價(jià)（元） | 5980 |
| 規(guī)格 | 5T | CAS號(hào) |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Pacbio做為三代測(cè)序的先驅(qū)，SMRT技術(shù)為我們提供了科研的更多可能。在三代轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，只有clontech一個(gè)品牌為PacBio提供配套的試劑盒。Tiosbio的出現(xiàn)為科研領(lǐng)域增加了選擇。Tiosbio根據(jù)PacBio的技術(shù)特點(diǎn)。進(jìn)行了大量的優(yōu)化和改進(jìn)。使整個(gè)操作程序由原來(lái)的2天時(shí)間縮短到8個(gè)小時(shí)以內(nèi)。Tiosbio推出了SUPERSWITCH?
三代轉(zhuǎn)錄組建庫(kù)試劑盒。SUPERSWITCH?第三代測(cè)序轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)構(gòu)建試劑盒提供了一種基于PCR方式從納克級(jí)總RNA合成高質(zhì)量cDNA的方法。SUPERSWITCH?第三代測(cè)序轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)構(gòu)建試劑盒cDNA合成技術(shù)是基于RNA轉(zhuǎn)錄5’末端跳轉(zhuǎn)機(jī)制 (Switching Mechanism at 5′ End of RNA Template，SMART) 技術(shù)。SMART技術(shù)非常適合起始樣品量有限的材料，能夠以2 ng總RNA（或極低濃度樣本）合成的高質(zhì)量cDNA，用于雜交探針、”Virtual Northern” blots、cDNA測(cè)序及其他應(yīng)用。
本試劑盒的5’和3’采用不同的接頭引物，在原始數(shù)據(jù)上就能直接判讀resds的來(lái)源是mRNA還是cDNA。本試劑盒采用SUPERSWITCH?
技術(shù)，生成高質(zhì)量的雙鏈cDNA。滿足nanopore的上機(jī)要求。
本試劑盒的建庫(kù)產(chǎn)物，可以直接連接PacBio的環(huán)狀測(cè)序接頭。省略了DNA的損傷修復(fù)和DNA的末端修復(fù)2個(gè)主要步驟。使操作時(shí)間大大的縮短。
本試劑盒的模板為樣本的總RNA,最大限度的反應(yīng)了樣本的轉(zhuǎn)錄組的均一性。本試劑盒根據(jù)PacBio的讀長(zhǎng)特點(diǎn)，增加了純化步驟，使產(chǎn)物的起始長(zhǎng)度為400bp。大大節(jié)省了測(cè)序資源。
包裝量及儲(chǔ)存條件
試劑盒組分：
試劑盒1
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目的 |
試劑 |
PacBio |
Nanopore |
||||
|
SP0021 |
SN0021 |
||||||
|
M/10次 |
L/20次 |
M/10次 |
L/20次 |
||||
|
反
轉(zhuǎn) 錄 |
1 |
●SUPERSWITCH? 3RRT Oligonucleotide |
12μL |
24 μL |
6μL |
12μL |
|
|
2 |
●dNTP Mix (10 mM) |
40 μL |
80 μL |
20 μL |
40 μL |
||
|
3 |
●Deionized H2O |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
||
|
4 |
●5X First-Strand Buffer (RNase-Free) |
60 μL |
120 μL |
30 μL |
60 μL |
||
|
5 |
●SUPERSWITCH? SolutionⅠ |
10 μL |
20 μL |
5 μL |
10 μL |
||
|
6 |
●SUPERSWITCH? SolutionⅡ |
10 μL |
20 μL |
5 μL |
10 μL |
||
|
7 |
●RNase Inhibitor (40 U/μL) |
12 μL |
25 μL |
6 μL |
12 μL |
||
|
8 |
●SUPERSWITCH? Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
12 μL |
25 μL |
6 μL |
12 μL |
||
|
9 |
●SUPERSWITCH? 5RRT Oligonucleotide |
12 μL |
24 μL |
6 μL |
12 μL |
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|
PCR |
10 |
●5AP PCR Primer (12 μM) |
100 μL |
200 μL |
100 μL |
200 μL |
|
|
11 |
●3AP PCR Primer (12 μM) |
100 μL |
200 μL |
100 μL |
200 μL |
||
|
12 |
●Marathon DNA Polymerase（1U/μL） |
24μL |
48μL |
24 μL |
48 μL |
||
|
13 |
●2×PCR Buffer |
765μL |
1530 μL |
765μL |
1530 μL |
||
|
14 |
●2.5 mM dNTP |
160μL |
320 μL |
200 μL |
400 μL |
||
試劑盒2：Tiosbio? 200bp Cleaner
|
目的 |
試劑 |
PacBio |
Nanopore |
|||
|
M/30次 |
L/60次 |
M/30次 |
L/60次 |
|||
|
PCR
產(chǎn)物 純化 |
1 |
○Buffer P5 |
7.5 mL |
15 mL |
15 mL |
30 mL |
|
2 |
○Wash Buffer |
3.25 mL |
6.5 mL |
6.5 mL |
13 mL |
|