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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

一種遠紅熒光染料（吸收波長 / 發(fā)射波長約為  640/662 nm ），用于對活細胞線粒體進行染色，并且該染料的積累取決于膜電位。   乙醛固定后，該染料可穩(wěn)定保存。

使用方法

1 儲存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需將本品回溫至室溫。

之后使用細胞培養(yǎng)級別的無水 DMSO ， 將其充分溶解至終濃度 1 mM 。

本品 M. Wt.= 543.58 g/mol ，換算下來， 50 μg 粉末只需加入 92 μL DMSO 即可得到 1 mM 儲存液?？筛鶕?jù)單次的使用量將儲存液分裝后放到 -20 ℃避光，避免反復凍融。

2 工作液的配制

根據(jù)不同的實驗目的使用不同的探針濃度，以下的起始操作條件僅作參考，可根據(jù)細胞類型和其他的相關因素如細胞或組織的透化等進行適當調(diào)整。

用適當?shù)木彌_液或者細胞培養(yǎng)基稀釋 1 mM 儲存液至工作液濃度。一般推薦使用濃度為 25-500  nM 。對于后續(xù)需要做固定或透化的樣本，推薦工作濃度為 100-500 nM ，為了降低過度加載導致的潛在偽影和線粒體毒性，在不影響實驗結果的前提下應盡可能低濃度染色。另外，濃度過高也可能對其他細胞結構進行染色。

3 染色及檢測

1 ）貼壁細胞的染色

培養(yǎng)皿 / 板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進行爬片培養(yǎng)。當細胞長至所需豐度，吸除培養(yǎng)液，加入 37 ℃預熱的染色工作液。在所使用細胞正常培養(yǎng)條件下孵育 15-45 min （最佳孵育時間需優(yōu)化）。染色結束后，使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液，即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標儀下讀數(shù)?；蛘哌M行后續(xù)的固定和透化步驟，見步驟 4 。

2 ）懸浮細胞的染色

離心收集細胞，吸除上清，利用 37 ℃預熱的染色工作液輕輕重懸細胞。在所使用細胞正常培養(yǎng)條件下孵育 15-45 min （最佳孵育時間需優(yōu)化）。染色結束后，離心收集細胞，利用 37 ℃預熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細胞，被染色的細胞可用流式細胞儀、熒光酶標儀、熒光顯微鏡進行分析。

如果需要蓋玻片上固定化的細胞，那么可在鋪片前先用多聚賴氨酸（ poly-D-lysine ）包被載玻片或蓋玻片。

或者進行后續(xù)的固定和透化步驟，見步驟 4 。

4 固定和透化

1 ）染色結束后，利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細胞；

2 ）小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預熱的含 2-4% 甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進行細胞固定。

3 ）清洗細胞：吸除固定液，用適當緩沖液沖洗細胞數(shù)次。

4 ）細胞透化（可選）：

像 ICC 等實驗需要細胞要做透化，則可將已固定的細胞直接加入含有去污劑如 Triton X-100 的緩沖液中孵育。透化結束后，用緩沖液清洗細胞即可進行后續(xù) ICC 實驗。經(jīng)檢測，利用含 0.2% Triton X-100 的 PBS 孵育內(nèi)皮細胞 10min 可以達到良好的透化效果。

另外，還可利用預冷的丙酮透化 5 min ，之后用 PBS 清洗細胞。經(jīng)驗證，即使后繼沒有進一步的抗體標記，丙酮透化處理也可降低背景信號。

注意事項

1 ） DMSO 有毒，使用時請小心操作。

2 ）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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