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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

是一種細(xì)胞滲透型的carbocyanine結(jié)構(gòu)衍生物，包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán)。本品是一種亮綠色熒光探針（（Ex=490 nm，Em=516 nm）），其在水溶液中幾乎不發(fā)熒光，只有當(dāng)聚集在線粒體的脂質(zhì)環(huán)境才能發(fā)熒光，背景熒光幾乎可忽略。使得操作步驟極其簡(jiǎn)單，只需用探針?lè)跤?xì)胞，即可被動(dòng)運(yùn)輸穿過(guò)細(xì)胞膜并直接聚集在活性線粒體上，可不經(jīng)過(guò)清洗直接觀察。與線粒體紅色熒光探針同的是本品定位于線粒體的能力不受線粒體膜電位影響，使其可能作為定量線粒體質(zhì)量的一種工具。本品經(jīng)乙醛固定后染料不穩(wěn)定，因此更適合活細(xì)胞染色。

雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123，也能很容易的聚集在功能線粒體上，但是一旦線粒體膜電位喪失即會(huì)被洗掉，從而在一些需要細(xì)胞進(jìn)行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實(shí)驗(yàn)中，使其應(yīng)用大受限制。

使用方法

1儲(chǔ)存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需將本品回溫至室溫。

之后使用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的無(wú)水DMSO將其充分溶解至終濃度1 mM。

本品M. Wt.= 671.88 g/mol，換算下來(lái)，50 μg粉末只需加入74.4μL DMSO即可得到1 mM儲(chǔ)存液。

可根據(jù)單次的使用量將儲(chǔ)存液分裝后放到-20℃避光，避免反復(fù)凍融。

2工作液的配制

根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛?，以下的起始操作條件僅作參考，可根據(jù)細(xì)胞類型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

用適當(dāng)?shù)木彌_液或者細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲(chǔ)存液至工作液濃度。本探針推薦濃度為20-200 nM，濃度過(guò)高可能對(duì)其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色。

3染色及檢測(cè)

1）貼壁細(xì)胞的染色

培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進(jìn)行爬片培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至所需豐度，吸除培養(yǎng)液，加入37℃預(yù)熱的染色工作液。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min（最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化）。染色結(jié)束后，使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液，即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標(biāo)儀下讀數(shù)。

2）懸浮細(xì)胞的染色

離心收集細(xì)胞，吸除上清，利用37℃預(yù)熱的染色工作液輕輕重懸細(xì)胞。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min（最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化）。染色結(jié)束后，離心收集細(xì)胞，利用37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細(xì)胞，被染色的細(xì)胞可用流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡進(jìn)行分析。

注意事項(xiàng)

1）DMSO有毒，使用時(shí)請(qǐng)小心操作。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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