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測(cè)定意義：

乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶，也是光下合成草酸的關(guān)鍵酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，對(duì)研究光呼吸代謝過(guò)程及其調(diào)控具有重要意義。

測(cè)定原理：

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙，在324nm有特征吸收峰。

組成：

試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨用前加10ml雙蒸水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml石英比色皿。

酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g， 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

酶活性計(jì)算公式

1．按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

GO活性（nmol/min /mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 392×△A÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：每克組織每分鐘氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

GO活性（nmol/min /g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 392×△A÷W

ε：乙醛酸苯腙毫摩爾消光系數(shù)：17L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.05ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3min

注意事項(xiàng)：

1. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 色素含量較高的樣品，可在提取酶時(shí)加活性炭吸附。